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離心機是蛋白表達通關裝備之一

發布時間:2020-12-17 14:38:21      點擊:

  想要通關蛋白表達少不了離心機。常言道細節決定成敗,尤其像蛋白表達提純這樣複雜的實驗。一個操作上的小失誤,可能直接影響最終結果。

  雖然可以大致分為三步,表達、分離、純化,但是這個過程十分繁瑣。

  蛋白表達前期還有一係列複雜過程,耗費時間也長,到最後一步,還不能放鬆警惕。

  蛋白進行純化是通關的最後一步,選擇合適的純化方法,可以提高蛋白的純化效率,讓蛋白純化簡單便捷。常用的方法有:親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、疏水層析等。

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  親和層析

  親和層析純化是利用生物大分子物質具有與某些相應的分子專一性可逆結合的特性進行蛋白純化的技術。

  離子交換層析

  離子交換層析是一種依據蛋白表麵所帶電荷量不同進行蛋白分離純化的技術。

  凝膠過濾層析

  凝膠過濾(也叫排阻層析或分子篩)是一種根據分子大小從混合物中分離蛋白質的方法。

  疏水作用層析

  疏水作用層析是利用鹽-水體係中樣品分子的疏水基團和層析介質的疏水配基之間疏水力的不同而進行分離的一種層析方法。

  雖然方法多種多樣,但是,都需要用離心機來進行分離純化。

  用脂肪氧合酶重組蛋白的誘導為例:

  1.接種含有重組脂肪氧合酶蛋白的大腸杆菌BL21菌株於5 mL LB液體培養基中(含100 ug/mL 氨苄青黴素),37℃震蕩培養過夜。

  2.按1∶50或1:100的比例稀釋過夜菌,一般轉接1 mL過夜培養物於100 mL(含100 ug/mL 氨苄青黴素)LB液體培養基中,37℃震蕩培養至OD600 = 0.6 - 0.8(最好0.6,大約需3 h)。取10 ul 樣品用於SDS-PAGE 分析。

  3.對照組不加誘導劑,實驗組加入IPTG至終濃度0.5 mmol/l,37℃繼續培養1-3h。

  4.離心機12000 rpm 離心10 min,棄上清,菌體沉澱保存於-20℃或-70℃冰箱中。

  以上就是關於蛋白表達的通關講解,本文重點就是要表達,一個實驗的成敗,細節很關鍵,雖然人工方麵是可以人為把控的,但是輔助設備的細節,還是要多加注意,選一台合適的離心機很關鍵。


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